Έχει πέσει η νύχτα στο Ινστιτούτο Σμιθσόνιαν της Ουάσινγκτον. Οι ξεναγοί έχουν επιστρέψει στα σπίτια τους, τα φώτα έχουν σβήσει, τα παιδιά του σχολείου έχουν ξαπλώσει στα κρεβάτια τους… όμως κάτι απίστευτο μοιάζει να αναδεύει στο σκοτάδι, καθώς ο πρώην νυχτοφύλακας Larry Daley (Ben Stiller) παρασύρεται στην πιο φανταστική περιπέτεια της ζωής του, όταν η ιστορία γίνεται αληθινά η πραγματικότητα.